豬流行性腹瀉病毒(PEDV)ELISA檢測試劑盒使用說明書：

檢測原理：試劑盒采用一步間接法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被抗原的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUT OFF值相比較，從而判定標本中豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）的存在與否。

豬流行性腹瀉病毒(PEDV)ELISA檢測試劑盒操作步驟:

①從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

②設置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各 50μL；

③待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加稀釋液 40μL；

④隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

⑤棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

⑥每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

⑦每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的OD 值。

實驗結果判斷：

①試驗有效性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00； 陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15。

② 臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

③陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

④陽性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

常見問題解答：

1.   問：如何選擇合適的陽性對照？

上海軒澤物解答：陽性對照的基本組成應該盡量與檢測樣本的組成一致，一般陽性對照多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質，加入一定量的待檢物質。比如：以人血清為標本的測定，陽性對照多用確定的病人血清或者以覆蓋人血漿為原料加入一定量標準品。

2. 問：我能否在實驗開始前*收集樣品？

上海軒澤物解答：可以。如若收集的樣本不能及時進行檢測，請保存至-20℃或按照說明書進行保存。應避免反復凍融。

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